|
Набор для скрининга
Инструкция по применению
I. Подготовка препаратов
1. Препараты, окрашенные по Папаниколау: удалить покровное стекло и среду для заливки, помещая препараты на лотке в кювету с ксилолом. Не снимайте покровное стекло с силой, его надо снимать осторожно!
Примечание:в зависимости от того, как долго препараты были закрыты покровными стеклами, может потребоваться их вымачивание в ксилоле от нескольких дней до недели в случае очень старых препаратов. Обесцвечивание препаратов не требуется.
2. Нативные мазки: фиксировать мазки 20 минут в 96% этаноле и высушить их, защищая от пыли. Хранить мазки при комнатной температуре (17 – 27 °С).
3. Жидкостная цитология: приготовить монослойные препараты в соответствии с предложенным производителем протоколом.
4. Гистологические срезы: депарафинировать срезы, как обычно.
II. Восстановление антигена
1. Всегда наряду с окрашиваемыми препаратами используйте один препарат положительного контроля. Отметьте матовый конец передней стороны стекла с положительным контролем карандашом, чтобы проверять правильность его положения на последующих этапах.
2. Регидрировать мазки и положительный контроль, проведя их через возрастающий ряд спиртов: по 2 минуты в 96%, 70%, 50% спирте и, наконец, 2 минуты в Aqua dest. (дистиллированной воде).
3. Демаскировка антигенов: использование микроволновой печи или водяной бани
Микроволновая печь:
- Поместите препараты в поднос, который установите в кювету, и залейте препараты цитратным буфером.
- Доведите в микроволновой печи до кипения, не закрывая крышкой (3 – 4 мин при макс. мощности).
- Закройте крышкой и продолжите кипячение при слабой мощности 20 минут.
Рекомендация: через 10 минут снимите крышку и проверьте уровень буфера – при необходимости добавьте цитратный буфер. Снова закройте крышкой и продолжайте кипячение в микроволновой печи еще 10 минут. Препараты должны быть постоянно полностью покрыты буфером, чтобы они не высыхали во время кипячения
Водяная баня:.
- Поместите препараты в поднос, который установите в кювету, и залейте препараты цитратным буфером.
- Доведите до кипения на водяной бане, не закрывая крышкой.
- Закройте крышкой и продолжите кипячение 20 минут.
4. Дайте препаратам остыть в цитратном буфере в течение 10 минут.
III. Иммунохимическое окрашивание
Важно:
Все этапы должны проходить при комнатной температуре (17 – 27 °С).
1. Поместите поднос с препаратами в кювету с промывным буфером. Промойте препараты 1 минуту в промывном буфере (руками поднимайте и опускайте поднос или поставьте кювету на качалку).
Выньте препараты из подноса и удалите излишки буфера, прикасаясь краями препаратов к фильтровальной бумаге. Поместите препараты на ровную, не адсорбирующую поверхность (например, лабораторный стол, стекло).
2. Нанесите на препарат 1 каплю антитела cytoactiv® (флакон с белой крышкой), покройте большим покровным стеклом одноразового использования и инкубируйте 30 минут при комнатной температуре (см. выше).
3. Аккуратно удалите покровные стекла и перенесите препараты в поднос. Поместите поднос с препаратами в кювету с промывным буфером. Промойте препараты 1 минуту в промывном буфере (руками поднимайте и опускайте поднос или поставьте кювету на качалку).
Выньте препараты из подноса и удалите излишки буфера, прикасаясь краями препаратов к фильтровальной бумаге. Поместите препараты на ровную, не адсорбирующую поверхность (например, лабораторный стол, стекло).
4. Нанесите на препарат 1 каплю детекторного реагента (флакон с желтой крышкой), покройте большим покровным стеклом одноразового использования и инкубируйте 10 минут при комнатной температуре (см. выше).
5. Аккуратно удалите покровные стекла и перенесите препараты в поднос. Поместите поднос с препаратами в кювету с промывным буфером. Промойте препараты 1 минуту в промывном буфере (руками поднимайте и опускайте поднос или поставьте кювету на качалку).
Выньте препараты из подноса и удалите излишки буфера, прикасаясь краями препаратов к фильтровальной бумаге. Поместите препараты на ровную, не адсорбирующую поверхность (например, лабораторный стол, стекло).
6. Добавьте 1 каплю хромогена (флакон с красной крышкой), покройте большим покровным стеклом одноразового использования и инкубируйте 5 минут при комнатной температуре (см. выше).
7. Аккуратно удалите покровные стекла и перенесите препараты в поднос. Поместите поднос с препаратами в кювету с дистиллированной водой. Промойте препараты 1 минуту в дистиллированной воде (руками поднимайте и опускайте поднос или поставьте кювету на качалку).
IV. Подкрашивание
8. Поместите поднос с препаратами в кювету с неразбавленным гематоксилином (например, гематоксилином Майера) и подкрашивайте 10 сек.
Немедленно перенесите поднос с препаратами в кювету с водопроводной водой и проливайте препараты проточной водой 3 – 5 минут (для их посинения).
Примечание: Результаты реакции окрашивания видны под микроскопом и без подкрашивания. Само по себе подкрашивание позволяет выявлять морфологию клетки.
9. Закройте окрашенный препараты водорастворимой средой для заливки (Aquatex, Merck) и покровными стеклами.
10. Оцените препараты под микроскопом. Мы рекомендуем микроскопию в светлом поле, начиная с линз 4х или 10х. Сначала следует оценить положительный контроль.
|
copyright cytoimmun 2007 